Luận án Nghiên cứu bào chế và đánh giá sinh khả dụng hỗn dịch nano piroxicam dùng cho nhãn khoa

 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ 
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI 
********** 
NGUYỄN THỊ MAI ANH 
NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ 
SINH KHẢ DỤNG HỖN DỊCH NANO PIROXICAM 
DÙNG CHO NHÃN KHOA 
LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC 
HÀ NỘI 2014 
 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ 
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI 
********** 
NGUYỄN THỊ MAI ANH 
NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ 
SINH KHẢ DỤNG HỖN DỊCH NANO PIROXICAM 
DÙNG CHO NHÃN KHOA 
LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC 
 Ã S : 62.72.04.02 
 gười hướng dẫn khoa học: PGS. TS. Nguyễn Văn Long 
 PGS TS. Trịnh Văn Lẩu 
HÀ NỘI 2014
i 
LỜI CẢM ƠN 
Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: 
 PGS. TS. Nguyễn Văn Long 
 PGS. TS. Trịnh Văn Lẩu 
Những người thày đã nhiệt tình hướng dẫn và hết lòng giúp đỡ tôi trong 
thời gian làm luận án vừa qua. 
Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới GS. TS. Võ Xuân Minh, 
PGS. TS. Nguyễn Đăng Hòa, PGS. TS. Phạm Thị Minh Huệ, 
TS. Nguyễn Trần Linh cùng toàn thể các thày, cô giáo, kỹ thuật viên bộ môn 
Bào chế, ộ môn Dược lực ộ môn ông nghiệp ược đã nhiệt tình giúp đỡ, 
tạo điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành luận án này. 
Tôi xin trân trọng cảm ơn: 
Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương 
Trung tâm Kiểm nghiệm và nghiên cứu dược quân đội 
Đã nhiệt tình giúp đỡ tôi hoàn thành những nội dung thực nghiệm trong 
quá trình học tập và nghiên cứu khoa học. 
Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu Nh trường, 
PGS. TS. Nguyễn Thanh Bình, cùng các chuyên iên phòng Đ o tạo 
sau đại học đã quan tâm giúp đỡ tôi trong quá trình công tác, học tập và 
nghiên cứu. 
Cuối cùng, tôi xin cảm ơn những người thân trong gia đình ạn bè 
 đã luôn ở ên, giúp đỡ, động viên, tạo mọi điều kiện thuận lợi để tôi 
 hoàn thành luận án. 
 Hà Nội, ng y 10 tháng 9 năm 2013 
 Nguyễn Thị Mai Anh 
ii 
LỜI CAM ĐOAN 
 ôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. 
Các số liệu, kết quả nêu trong luận án là trung thực và chưa từng được 
ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác. 
 Nguyễn Thị Mai Anh 
iii 
DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT 
AUC : Area under the curve (Diện tích ưới đường cong) 
BP : British Pharmacopoeia (Dược điển Anh) 
Cmax : Maximum concentration (Nồng độ thuốc tối đa) 
Na2EDTA : Dinatri edetat 
FDA : Food and Drug Administration ( ơ quan quản lý thuốc – thực phẩm) 
HPLC : High performance liquid chromatography 
(Sắc ký lỏng hiệu năng cao) 
HPMC : Hydroxypropyl methyl cellulose 
HQC : High quality control sample (Mẫu kiểm chứng nồng độ cao) 
KTTP : Kích thước tiểu phân 
L.A.F : Laminnar flow B n th i khí ô khuẩn 
LLOQ : Lower limit of quantification (Giới hạn định lượng ưới) 
LQC : Low quality control sample (Mẫu kiểm chứng nồng độ thấp) 
MQC 
MRT 
PDI 
: 
: 
Middle quality control sample (Mẫu kiểm chứng nồng độ trung ình) 
Mean residence time (Thời gian lưu thuốc trung ình 
Poly dispersity index ( h số đa phân tán) 
PEG : Polyoxyethylen glycol 
PLGA : Poly(lactic-co-glycolic acid) 
PVA : Alcol polyvinic 
PVP 
Px 
: 
: 
Polyvinyl pyrolidon K.30 
Piroxicam 
RSD : Relative standard deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) 
SD : Standard deviation (Độ lệch chuẩn) 
SEM : Scanning electron microscope (Kính hiển i điện tử quét) 
USP : The United States Pharmacopoeia (Dược điển Mỹ) 
Tmax : Maximum time (Thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa) 
TEM 
 : Transmission electron microscope (Kính hiển i điện tử truyền qua) 
iv 
MỤC LỤC 
ĐẶT VẤN ĐỀ .................................................................................................. 1 
CHƯƠNG I: TỔNG QUAN ........................................................................... 3 
1.1. PIROXICAM 3 
1.1.1. ông thức .......................................................................................... 3 
1.1.2. ột số đặc điểm ................................................................................ 3 
1.1.3. ác dụng, chỉ định ............................................................................. 4 
1.1.4. ác dạng bào chế có trên thị trường ................................................. 4 
1.2. CÔNG NGH A R C 4 
1.2.1. Vài nét về hệ nano ............................................................................. 4 
1.2.2. u, nhược điểm của dạng thuốc nano .............................................. 6 
1.2.3. Một số chế phẩm thuốc nano trên thị trường .................................. 14 
1.3. HỖN DỊCH NANO ỨNG DỤNG TRONG BÀO CH THU C 15 
1.3.1. Khái niệm về hỗn dịch nano ........................................................... 15 
1.3.2. Phân loại hỗn dịch nano .................................................................. 15 
1.3.3. Độ ổn định vật lý của hỗn dịch nano .............................................. 15 
1.3.4. Thành phần hỗn dịch nano .............................................................. 18 
1.3.5. Kỹ thuật bào chế hỗn dịch nano ...................................................... 21 
1.4. THU C NHÃN KHOA BÀO CH TỪ H NANO 25 
1.4.1. Đặc điểm sinh lý liên quan đến hấp thu thuốc ở mắt ...................... 25 
1.4.2. Thuốc tác dụng tại mắt bào chế từ hệ nano .................................... 26 
1.4.3. Đánh giá tác dụng của thuốc nano trên mắt .................................... 28 
CHƯƠNG II: NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ 
VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ......................................................... 35 
2.1. LI I Ị 35 
2.1.1. guyên liệu ..................................................................................... 35 
v 
2.1.2. Thiết bị ............................................................................................ 36 
2.2. Ơ Á I Ứ 37 
2.2.1. hương pháp bào chế piroxicam nano ............................................ 37 
2.2.2. hương pháp đánh giá hệ tiểu phân nano ....................................... 40 
2.2.3. hương pháp bào chế hỗn dịch nhỏ mắt chứa piroxicam nano ...... 44 
2.2.4. hương pháp theo dõi độ ổn định ................................................... 45 
2.2.5. hương pháp đánh giá sinh khả dụng hỗn dịch nano ..................... 45 
2.3. Ơ SỞ I Ứ 50 
CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ................................................. 51 
3.1. BÀO CH PIROXICAM NANO TINH THỂ 51 
3.1.1. Nghiên cứu bào chế piroxicam nano tinh thể ................................. 51 
3.1.2. Đánh giá một số đặc tính của piroxicam nano tinh thể .................. 63 
3.2. BÀO CH PIROXICAM NANO POLYME 67 
3.2.1. ghiên cứu bào chế piroxicam nano polyme ................................. 67 
3.2.2. Đánh giá một số đặc tính hệ tiểu phân piroxicam nano polyme .... 80 
3.2.3. Độ ổn định của piroxicam nano polyme đông khô ......................... 84 
3.3. BÀO CH HỖN DỊCH NANO PIROXICAM 0,5% 
DÙNG CHO NHÃN KHOA 89 
3.3.1. Nghiên cứu lựa chọn thành phần hỗn dịch nano piroxicam ........... 89 
3.3.2. Khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến tính thấm của piroxicam.. 94 
3.3.3. Quy trình bào chế hỗn dịch nhỏ mắt chứa piroxicam nano ............ 99 
3.3.4. heo dõi độ ổn định của hỗn dịch nano piroxicam ..................... 101 
3.4. ĐÁ IÁ SI K Ả DỤNG HỖN DỊCH 
 ỨA IR I A A R 101 
3.4.1. Thẩm định phương pháp định lượng piroxicam trong thủy dịch . 101 
3.4.2. Đánh giá sinh khả dụng của hỗn dịch nano piroxicam ................. 110 
CHƯƠNG IV. BÀN LUẬN ........................................................................ 115 
vi 
4.1. VỀ PIROXICAM 115 
4.2. VỀ KỸ THUẬT BÀO CH PIROXICAM NANO 116 
4.2.1. ôi trường phân tán ...................................................................... 117 
4.2.2. ung môi hòa tan dược chất ......................................................... 118 
4.2.3. Chất mang Eudragit ...................................................................... 120 
4.2.4. Chất diện hoạt ............................................................................... 122 
4.2.5. Chất chống tạo bọt ........................................................................ 123 
4.2.6. á dược tạo khung trong đông khô ............................................... 124 
4.2.7. Nhiệt độ ......................................................................................... 126 
4.2. . Điều kiện khuấy trộn ..................................................................... 127 
4.2.9. Kỹ thuật bốc hơi dung môi ........................................................... 128 
4.3. VỀ H TIỂU PHÂN NANO PIROXICAM 129 
4.4. Ề Ỗ Ị A Ù Ã K A 131 
4.5. Ề ĐÁ IÁ SI K Ả Ụ ỦA Ỗ Ị A 134 
4.5.1. hương pháp đánh giá sinh khả dụng ........................................... 134 
4.5.2. Quy trình đánh giá sinh khả dụng ................................................. 137 
4.6. ĐỊ ỚNG PHÁT TRIỂN CÁC K T QUẢ NGHIÊN CỨU 140 
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT ........................................................................ 141 
DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ 
LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN .................................................................... 143 
vii 
DANH MỤC CÁC HÌNH V , Đ THỊ 
Hình 1. 1. Hiện tượng kết tinh lại ................................................................... 16 
 ình 1. 2. ô hình lớp điện kép xung quanh tiểu phân tích điện. ................. 16 
 ình 1. 3. ô hình đánh giá khả năng thấm của dược chất qua giác mạc 
bằng phương pháp vi thẩm tích .................................................. 32 
 ình 3. 1. Hiện tượng kết tụ tiểu phân piroxicam nano tinh thể .................... 55 
 ình 3. 2. Hình ảnh tiểu phân piroxicam nano sau khi đông khô .................. 56 
 ình 3. 3. hân bố KTTP piroxicam nano tinh thể ........................................ 59 
 ình 3. 4. hân bố KTTP piroxicam nano tinh thể 
(sử dụng natri desoxycholat) ...................................................... 61 
 ình 3. 5. Hình ảnh hệ nano piroxicam qua kính hiển vi điện tử quét ........... 63 
 ình 3. 6. Phổ nhiễu xạ tia X của piroxicam nguyên liệu .............................. 64 
 ình 3.7. Phổ nhiễu xạ tia X của piroxicam nano tinh thể ............................. 64 
 ình 3. . Đ thị biểu diễn độ hòa tan của piroxicam nano tinh thể .............. 66 
 ình 3. . Hình ảnh tiểu phân piroxicam qua kính hiển vi điện tử quét (SEM)
 ..................................................................................................... 80 
 ình 3. 10. Hình ảnh tiểu phân piroxicam nano polyme 
qua kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM) ................................ 81 
 ình 3. 11. hổ nhiễu xạ tia X của các mẫu nghiên cứu ............................... 82 
 ình 3. 12. Đ thị biểu diễn độ hòa tan của piroxicam nano polyme và 
nguyên liệu .................................................................................. 83 
 ình 3. 13. Hình ảnh tiểu phân piroxicam nano polyme sau 1 năm 
 bảo quản ở điều kiện thực (TEM) .............................................. 87 
 ình 3. 14. hổ nhiễu xạ tia X của piroxicam nano polyme đông khô 
sau 1 năm bảo quản ở điều kiện thực .......................................... 87 
 ình 3. 15. Đ thị biểu diễn độ hòa tan của piroxicam nano polyme 
sau bào chế và sau 1 năm bảo quản ở điều kiện thực ................. 89 
viii 
 ình 3. 16. Đánh giá khả năng thấm của piroxicam qua màng thẩm tích ...... 95 
 ình 3. 17. Ảnh hưởng của độ nhớt đến tính thấm của piroxicam 
qua giác mạc mắt thỏ .................................................................. 96 
 ình 3. 1 . Ảnh hưởng của kích thước tiểu phân đến tính thấm piroxicam 
qua giác mạc mắt thỏ .................................................................. 97 
 ình 3. 1 . Ảnh hưởng của chất diện hoạt tới tính thấm của piroxicam 
qua giác mạc mắt thỏ .................................................................. 98 
 ình 3. 20. Ảnh hưởng của Tween 80 và Na2E A đến tính thấm piroxicam 
qua giác mạc mắt thỏ .................................................................. 98 
 ình 3. 21. Sơ đ quy trình bào chế môi trường phân tán của hỗn dịch ........ 99 
 ình 3. 22. Sơ đ quy trình bào chế bột đông khô vô khuẩn 
chứa piroxicam nano polyme .................................................... 100 
 ình 3. 23. Sắc ký đ của thủy dịch mẫu trắng ............................................ 102 
 ình 3. 24. Sắc ký đ của mẫu chứa piroxicam trong thủy dịch, 
 n ng độ 200 ng/ml ................................................................... 102 
 ình 3. 25. Đ thị biểu diễn mối tương quan giữa n ng độ piroxicam 
trong thủy dịch và diện tích pic ................................................ 104 
 ình 3. 26. Đ thị biểu diễn mức độ thấm của piroxicam 
qua giác mạc mắt thỏ ................................................................ 112 
 ình 3. 27. Đ thị so sánh mức độ thấm piroxicam qua giác mạc mắt thỏ 
từ hỗn dịch nano polyme và hỗn dịch nano tinh thể ................. 114 
ix 
DANH MỤC CÁC BẢNG, BI U 
 ảng 1. 1. ột số chất ổn định sử dụng trong hỗn dịch nano tinh thể ........... 18 
 ảng 1. 2. ột số công trình nghiên cứu bào chế hỗn dịch nano 
bằng phương pháp nhũ hóa và bốc hơi dung môi ......................... 23 
 ảng 1. 3. ột số nghiên cứu về tính thấm của hỗn dịch nano trên giác mạc 
động vật đã bóc tách (ex vivo) .................................................... 29 
 ảng 1. 4. ột số đặc điểm giải phẫu, sinh lý của mắt người và mắt thỏ ...... 30 
 ảng 2. 1. guyên liệu sử dụng trong nghiên cứu ......................................... 35 
 ảng 2. 2. Thành phần tá dược bào chế piroxicam nano tinh thể ................... 37 
 ảng 2. 3. Thành phần tá dược bào chế piroxicam nano polyme ................... 38 
 ảng 3. 1. Độ tan của piroxicam trong một số dung môi (n=5) ..................... 51 
 ảng 3. 2. Thành phần tá dược bào chế piroxicam nano tinh thể ................... 52 
 ảng 3. 3. Kích thước tiểu phân piroxicam 
 bào chế ở những điều kiện nhiệt độ khác nhau (n=5)................ 53 
 ảng 3. 4. Kích thước tiểu phân piroxicam bào chế với các thiết bị khuấy 
khác nhau (n=5) .......................................................................... 54 
 ảng 3. 5. Đặc điểm của bánh đông khô piroxicam nano tinh thể (n=5) ....... 56 
 ảng 3. 6. Kích thước tiểu phân piroxicam khi thay đổi tỷ lệ dung dịch A và 
dung dịch B (n=5) ....................................................................... 57 
 ảng 3. 7. N ng độ piroxicam bão hòa trong các dung dịch PVA tại 250C 
(n=5) ............................................................................................ 57 
 ảng 3. . Kích thước tiểu phân piroxicam khi thay đổi n ng độ dung dịch 
PVA (n=5) ................................................................................... 58 
 ảng 3. . Kích thước tiểu phân piroxicam khi sử dụng chất diện hoạt trong 
dung dịch B (n=3) ....................................................................... 60 
 ảng 3. 10. Kích thước tiểu phân piroxicam khi sử dụng natri desoxycholat 
trong dung dịch A (n=3) ............................................................. 60 
 ảng 3. 11. Kích thước tiểu phân piroxicam khi bào chế với silicon (n=5) ... 62 
 ... 1997), "Physicochemical characterizations of 
piroxicam-poloxamer solid dispersion", Pharmaceutical development and 
technology, 2(4), pp. 403-407. 
107. Shudo J., Pongpeerapat A., Wanawongthai C., et al. (2008), "In vivo 
assessment of oral administration of probucol nanoparticles in rats", 
Biological & pharmaceutical bulletin, 31(2), pp. 321-325. 
108. Tamilvanan S., Benita S. (2004), "The potential of lipid emulsion for 
ocular delivery of lipophilic drugs", European journal of pharmaceutics 
and biopharmaceutics, 58(2), pp. 357-368. 
109. Thakur R., Gupta R. B. (2006), "Formation of phenytoin nanoparticles 
using rapid expansion of supercritical solution with solid cosolvent 
(RESS-SC) process", International journal of pharmaceutics, 308(1-2), 
pp. 190-199. 
110. Thote A. J., Gupta R. B. (2005), "Formation of nanoparticles of a 
hydrophilic drug using supercritical carbon dioxide and 
microencapsulation for sustained release", Nanomedicine: 
nanotechnology, biology and medicine, 1(1), pp. 85-90. 
111. Tozuka Y., Miyazaki Y., Takeuchi H. (2010), "A combinational 
supercritical CO2 system for nanoparticle preparation of indomethacin", 
International journal of pharmaceutics, 386(1-2), pp. 243-248. 
112. Trapani A., Laquintana V., Denora N., et al. (2007), "Eudragit RS 100 
microparticles containing 2-hydroxypropyl-[beta]-cyclodextrin and 
glutathione: Physicochemical characterization, drug release and transport 
studies", European journal of pharmaceutical sciences, 30(1), pp. 64-74. 
113. Tresset G., Davy Cheong W. C., Shireen Tan Y. L., et al. (2007), 
"Phospholipid-based artificial viruses assembled by multivalent cations", 
Biophysical journal, 93(2), pp. 637-644. 
114. The United States Pharmacopoeia 32 (2009), p. 3317. 
115. Van Eerdenbrugh B., Froyen L., Martens J., et al. (2007), 
"Characterization of physico-chemical properties and pharmaceutical 
performance of sucrose co-freeze-dried solid nanoparticulate powders of 
the anti-HIV agent loviride prepared by media milling", International 
Journal of Pharmaceutics, 338(1-2), pp. 198-206. 
116. Van Eerdenbrugh B., Van Den Mooter G., Augustijns P. (2008), "Top-
down production of drug nanocrystals: nanosuspension stabilization, 
miniaturization and transformation into solid products", International 
Journal of Pharmaceutics, 364(1), pp. 64-75. 
117. Vega E., Egea M., Valls O., et al. (2006), "Flurbiprofen loaded 
biodegradable nanoparticles for ophtalmic administration", Journal of 
sharmaceutical sciences, 95(11), pp. 2393-2405. 
118. Vrečer F., rbinc ., eden A. (2003 , haracterization of piroxicam 
crystal modifications", International journal of pharmaceutics, 256(1), 
pp. 3-15. 
119. Wu K., Li J., Wang W., et al. (2009), "Formation and characterization of 
solid dispersions of piroxicam and polyvinylpyrrolidone using spray 
drying and precipitation with compressed antisolvent", Journal of 
pharmaceutical sciences, 98(7), pp. 2422-2431. 
120. Wu X. G., Xin M., Yang L. N., et al. (2011), "The biological 
characteristics and pharmacodynamics of a mycophenolate mofetil 
nanosuspension ophthalmic delivery system in rabbits", Journal of 
pharmaceutical science, pp. 1350-1361. 
121. Xia D., Quan P., Piao H., et al. (2010), "Preparation of stable nitrendipine 
nanosuspensions using the precipitation-ultrasonication method for 
enhancement of dissolution and oral bioavailability", European journal of 
pharmaceutical sciences, 40(4), pp. 325-334. 
122. Xie Y., Cao W., Krishnan S., et al. (2008), "Characterization of mannitol 
polymorphic forms in lyophilized protein formulations using a 
multivariate curve resolution (MCR)-based Raman spectroscopic 
method", Pharmaceutical research, 25(10), pp. 2292-2301. 
123. Xiong R., Lu W., Yue P., et al. (2008), "Distribution of an intravenous 
injectable nimodipine nanosuspension in mice", Journal of pharmacy and 
pharmacology, 60(9), pp. 1155-1159. 
124. Yoncheva K., Vandervoort J., Ludwig A. (2011), "Development of 
mucoadhesive poly(lactide-co-glycolide) nanoparticles for ocular 
application", Pharmaceutical development and technology, 16 (1), pp. 29-
35. 
125. üksel ., Karataş A., Özkan ., et al. (2003), "Enhanced bioavailability 
of piroxicam using Gelucire 44/14 and Labrasol: in vitro and in vivo 
evaluation", European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics, 
56(3), pp. 453-459. 
126. Zamiri R., Zakaria A., Abbastabar H., et al. (2011), "Laser-fabricated 
castor oil-capped silver nanoparticles", International journal of 
nanomedicine, 6, pp. 565-571. 
127. Zhang X., Zhang H., Wu Z., et al. (2008), "Nasal absorption enhancement 
of insulin using PEG-grafted chitosan nanoparticles", European journal of 
pharmaceutics and biopharmaceutics, 68(3), pp. 526-534. 
128. Zhou Y., Kopecek J. (2013), "Biological rationale for the design of 
polymeric anti-cancer nanomedicines", Journal of drug targeting, 21(1), 
pp. 1-26. 
129. Zojaji S., Jalali F. (2012), "Preparation and assessment of piroxicam 
loaded solid lipid nanoparticles", Research in pharmaceutical sciences, 
7(5), p. S231. 
130. Zullo S. J., Srivastava S., Looney J. P., et al. (2002), "Nanotechnology: 
emerging developments and early detection of cancer. A two-day 
workshop sponsored by the national cancer institute and the national 
institute of standards and technology, August 30-31 2001, on the National 
Institute of Standards and Technology Campus, Gaithersburg, MD, USA", 
Disease markers, 18(4), pp. 153-158. 
131. Xiao X. C., Hong Z. G. (2010), "Firstborn microcrystallization method to 
prepare nanocapsules containing artesunate", International journal of 
nanomedicine, 5, p. 483-489. 
132. Zahr A. S., Davis C. A., Pishko M. V. (2006), "Macrophage uptake of 
core-shell nanoparticles surface modified with poly (ethylene glycol)", 
Langmuir - ACS Publications, 22(19), pp. 8178-8185. 
PHỤ LỤC 
1. Ụ LỤ 1: ột số kết quả đo kích thước tiểu phân 
2. Ụ LỤ 2: ột số kết quả đo thế Zeta 
3. Ụ LỤ 3: Kết quả thử vô khuẩn 
4. Ụ LỤ 4: ột số sắc ký đ định lượng piroxicam trong thủy dịch 
5. Ụ LỤ 5: ột số kết quả nghiên cứu tính thấm piroxicam 
 qua giác mạc mắt thỏ 
Phụ lục 1.1. Phân bố kích thước tiểu phân piroxicam nano tinh thể 
A: ngay sau khi bào ch , B: s u 1 nă bảo quản đ u kiện th c 
A 
B 
Phụ lục 1.2. Phân bố kích thước tiểu phân piroxicam nano polyme 
A: ngay sau khi bào ch B: s u 1 nă bảo quản đ u kiện th c 
A 
B 
Phụ lục 2.1. Thế eta của tiểu phân piroxicam nano tinh thể 
 : rong nước, B,C,D: rong rường đệ c r c-c r , đệ ce c-acetat 
v đệ hos h 
A 
B 
Phụ lục 2.1. Thế eta của tiểu phân piroxicam nano tinh thể 
 : rong nước, B,C,D: rong rường đệ c r c-c r , đệ ce c-acetat 
v đệ hos h 
C 
D 
Phụ lục 2.2. Thế eta của tiểu phân piroxicam nano polyme 
A, B: Eudragit RS 100, Piroxicam-Eudragit (1:5) 
A 
B 
Phụ lục 3. Kết qu thử vô khuẩn 
Hình A: Hình nh các mẫu nuôi cấy trong môi trường thioglycolat 
sau 14 ngày 
Hình B: Hình nh các mẫu nuôi cấy trong môi trường casein 
 đậu tương lỏng sau 14 ngày 
Phụ lục 4.1. Sắc ký đồ định lượng piroxicam trong thủy dịch 
 tại thời điểm 5 ph t sau khi nhỏ thuốc 
H nh : hỗn dịch qu ước, H nh B: hỗn dịch n no 
User name: Chi 
 12/24/2011 12:25:51 AM 
 D:\Methods\Piroxicam MA.met 
 D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 5HD-Rep2 
Vial 7 Volume inj 50 
SPD10Avp 
(254nm) 
Pk # Name Retention Time Area Asymmetry Theoretical 
plates 
1 Piroxicam 6.757 72751 1.06 737.68 
Totals 
 72751 
Hình A 
Piroxicam 
 User name: Chi 
 12/24/2011 3:41:29 AM 
 D:\Methods\Piroxicam MA.met 
 D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 5HN-Rep1 
Vial 17 Volume inj 50 
SPD10Avp 
(254nm) 
Pk # Name Retention Time Area Asymmetry Theoretical 
plates 
1 Piroxicam 6.777 46190 1.10 1354.06 
Totals 
 46190 
Hình B 
Minutes
0 1 2 3 4 5 6 7 8
V
o
lts
0.00
0.01
0.02
1
P
ir
o
xi
ca
m
6
.7
5
7
Minutes
0 1 2 3 4 5 6 7 8
V
o
lt
s
0.00
0.01
0.02
1
P
ir
o
x
ic
a
m
6
.7
7
7
Phụ lục 4.2. Sắc ký đồ định lượng piroxicam trong thủy dịch 
 tại thời điểm 30 ph t sau khi nhỏ thuốc 
H nh : hỗn dịch qu ước, H nh B: hỗn dịch n no 
User name: Chi 
 12/24/2011 2:08:51 AM 
 D:\Methods\Piroxicam MA.met 
 D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 30HD-Rep2 
Vial 12 Volume inj 50 
 SPD10Avp (254nm) 
Pk # Name Retention Time Area Asymmetry Theoretical 
plates 
1 Piroxicam 6.783 59731 1.13 2170.06 
Totals 
 59731 
Hình A 
Piroxicam 
 User name: Chi 
 12/24/2011 5:24:34 AM 
 D:\Methods\Piroxicam MA.met 
 D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 30HN-Rep1 
Vial 22 Volume inj 50 
SPD10Avp 
(254nm) 
Pk # Name Retention Time Area Asymmetry Theoretical 
plates 
1 Piroxicam 6.792 369652 1.12 3276.21 
Totals 
 369652 
Hình B 
Minutes
0 1 2 3 4 5 6 7 8
V
o
lts
0.00
0.01
0.02
1
P
ir
o
xi
ca
m
6
.7
8
3
Minutes
0 1 2 3 4 5 6 7 8
V
o
lts
0.00
0.01
0.02
0.03
1
P
ir
o
xi
ca
m
6
.7
9
2
Phụ lục 4.3. Sắc ký đồ định lượng piroxicam trong thủy dịch 
 tại thời điểm 60 ph t sau khi nhỏ thuốc 
H nh : hỗn dịch qu ước, H nh B: hỗn dịch n no 
Piroxicam 
 User name: Chi 
 12/24/2011 2:19:06 AM 
 D:\Methods\Piroxicam MA.met 
 D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 60HD-Rep1 
Vial 13 Volume inj 50 
SPD10Avp 
(254nm) 
Pk # Name Retention Time Area Asymmetry Theoretical 
plates 
1 Piroxicam 6.813 46186 0.91 1724.20 
Totals 
 46186 
Hình A 
Piroxicam 
 User name: Chi 
 12/24/2011 4:43:24 AM 
 D:\Methods\Piroxicam MA.met 
 D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 60HN-Rep1 
Vial 20 Volume inj 50 
SPD10Avp (254nm) 
Pk # Name Retention Time Area Asymmetry Theoretical plates 
1 Piroxicam 6.770 171372 1.24 1660.74 
Totals 
 171372 
Hình B 
Minutes
0 1 2 3 4 5 6 7 8
V
o
lt
s
0.00
0.01
0.02
1
P
ir
o
x
ic
a
m
6
.8
1
3
Minutes
0 1 2 3 4 5 6 7 8
V
o
lts
0.00
0.01
0.02
1
P
ir
o
xi
ca
m
6
.7
7
0
Phụ lục 4.4. Sắc ký đồ định lượng piroxicam trong thủy dịch 
 tại thời điểm 180 ph t sau khi nhỏ thuốc 
H nh : hỗn dịch qu ước, H nh B: hỗn dịch n no 
Piroxicam 
 User name: Chi 
 12/24/2011 3:10:36 AM 
 D:\Methods\Piroxicam MA.met 
 D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 180HD-Rep2 
Vial 15 Volume inj 50 
SPD10Avp 
(254nm) 
Pk # Name Retention Time Area Asymmetry Theoretical 
plates 
1 Piroxicam 6.837 8166 0.92 1332.05 
Totals 
 8166 
Hình A 
Piroxicam 
 User name: Chi 
 12/24/2011 6:26:30 AM 
 D:\Methods\Piroxicam MA.met 
 D:\HPLC\Piroxicam MA\231211\Piroxicam 180HN-Rep1 
Vial 25 Volume inj 50 
Area 
54244 Hình B 
Minutes
0 1 2 3 4 5 6 7 8
V
o
lt
s
0.00
0.01
0.02
1
P
ir
o
x
ic
a
m
6
.8
3
7
Minutes
0 1 2 3 4 5 6 7 8
V
o
lt
s
0.00
0.01
0.02
1
P
ir
o
x
ic
a
m
6
.8
0
2
Phụ lục 5.1. Đánh giá kh năng thấm piroxicam qua màng thẩm tích 
Thời 
gian 
Khối lượng Px thấm qua giác mạc ( g) từ các hỗn dịch 
12cps 9cps 6cps Tween 80 Cremophor 
RH 40 
Na2EDTA 
0 0 0 0 0 0 0 
1 5,3 
± 0,4 
25,4 
± 2,1 
42,5 
± 3,1 
48,7 
± 3,2 
52,3 
± 4,7 
50,9 
± 4,5 
2 37,5 
± 1,5 
39,5 
± 1,4 
68,3 
± 2,0 
82,1 
± 2,6 
86,5 
± 2,7 
85,3 
± 1,9 
3 45,3 
± 1,1 
82,4 
± 2,4 
105,6 
± 3,1 
125,2 
± 3,3 
118,7 
± 3,5 
121,8 
± 3,1 
4 56,8 
± 1,7 
103,7 
± 1,9 
152,8 
± 2,5 
208,1 
± 3,3 
215,3 
± 3,1 
205,88 
± 1,8 
5 76,2 
± 2,0 
139,5 
± 1,1 
212,6 
± 4,1 
258,7 
± 4,5 
262,5 
± 5,0 
251,6 
± 4,9 
6 81,7 
± 1,8 
148,6 
± 2,7 
247,9 
± 3,2 
287,3 
± 3,5 
300,5 
± 5,6 
291,68 
± 5,5 
Phụ lục 5.2. Ảnh hưởng của độ nhớt đến kh năng thấm piroxicam 
 qua giác mạc mắt thỏ 
Thời 
gian 
(giờ) 
Khối lượng Px thấm qua giác mạc ( g) từ các hỗn dịch 
có độ nhớt khác nhau 
6cps 9cps 12cps 
0 0 0 0 
0,5 25,2 ± 1,9 15,7 ± 0,7 16,5 ± 0,8 
1 70,3 ± 2,3 30,5 ± 2,0 35,7 ± 1,9 
1,5 148,6 ± 2,8 59,2 ± 1,2 56,8 ± 1,7 
2 196,9 ± 3,5 121,8 ± 1,8 82,6 ± 1,5 
2,5 270,8 ± 4,6 186,7 ± 2,5 130,5 ± 1,3 
3 354,6 ± 5,1 246,7 ± 2,9 178,9 ± 1,7 
4 457,2 ± 6,9 303,8 ± 3,7 200,6 ± 1,2 
5 553,8 ± 7,7 356,9 ± 4,2 247,6 ± 4,1 
6 601,5 ± 7, 5 400,0 ± 6,9 250,0 ± 6,5 
Phụ lục 5.3. Ảnh hưởng của KTTP đến kh năng thấm piroxicam 
qua giác mạc mắt thỏ 
Thời 
gian 
(giờ) 
Khối lượng Px thấm qua giác mạc ( g) từ các hỗn dịch 
có KTTP khác nhau 
300 nm 600 nm 1000 nm HD quy ước 
0 0 0 0 0 
0,5 25,8 ± 2,9 11,9 ± 0,6 10,2 ± 1,1 5,5 ± 0,7 
1 76,5 ± 4,3 32,4 ± 0,5 25,8 ± 0,9 8,8 ± 0,9 
1,5 158,4 ± 3,8 67,2 ± 1,0 49,3 ± 0,6 15,5 ± 0,8 
2 256,9 ± 4,5 88,2 ± 1,1 52,7 ± 1,1 21,3 ± 1,0 
2,5 330,8 ± 4,6 128,4 ± 2,9 75,4 ± 0,8 34,1 ± 0,8 
3 404,6 ± 5,1 152,9 ± 2,8 91,5 ± 1,2 48,5 ± 0,9 
4 497,2 ± 6,9 189,3 ± 3,1 105,8 ± 1,7 54,3 ± ,0,7 
5 583,8 ± 7,4 267,5 ± 4,5 132,7 ± 2,1 59,4 ± 0,8 
6 631,5 ± 7,8 302,4 ± 5,2 156,4 ± 2,3 61,2 ± 0,6 
Phụ lục 5.4. Ảnh hưởng của chất diện hoạt đến kh năng thấm piroxicam 
qua giác mạc mắt thỏ 
Thời 
gian 
Khối lượng Px thấm qua giác mạc ( g) từ hỗn dịch 
chứa các chất diện hoạt (CDH) 
Tween 20 Tween 40 Tween 80 Cremophor 
RH40 
Không CHD 
0 0 0 0 0 0 
0,5 52,7 ± 5,5 35,7 ± 5,3 102,5 ± 3,5 66,5 ± 4,8 25,2 ± 1,9 
1 137,3 ± 8,6 98,2 ± 7,5 153,7 ± 3,1 145,3 ± 7,8 70,3 ± 2,3 
1,5 220,6 ± 9,3 162,9 ± 4,6 257,3 ± 4,1 235,7 ± 10,2 148,6 ± 2,8 
2 276,5 ± 8,2 221,5 ± 6,9 360,8 ± 5,6 302,6 ± 8,4 196,9 ± 3,5 
2,5 392,7 ± 6,9 293,1 ± 5,1 457,2 ± 7,0 420,4 ± 8,9 270,8 ± 4,6 
3 450,88 ± 7,9 402,6 ± 7,5 565,6 ± 9,1 507,3 ± 11,1 354,6 ± 5,1 
4 597,3 ± 9,3 480,9 ± 7,4 670,8 ± 7,5 602,9 ± 9,9 457,2 ± 6,9 
5 650,7 ± 9,9 576,2 ± 8,7 732,7 ± 8,2 676,2 ± 7,6 553,8 ± 7,7 
6 709,5 ± 11,0 620,4 ± 9,4 780,6 ± 8,8 721,2 ± 8,2 601,5 ± 7, 5 
Phụ lục 5.5. Ảnh hưởng của T een 80 và Na2EDTA đến kh năng thấm 
piroxicam qua giác mạc mắt thỏ 
Thời 
gian 
(giờ) 
Khối lượng Px thấm qua giác mạc ( g) 
 từ hỗn dịch chứa T een 80 và Na2EDTA 
Không CHD Tween 80 Tween 80& 
Na2EDTA 
0 0 0 0 
0,5 25,2 ± 1,9 102,5 ± 3,5 250,6 ± 4,8 
1 70,3 ± 2,3 153,7 ± 3,1 383,8 ± 6,6 
1,5 148,6 ± 2,8 257,3 ± 4,1 527,5 ± 7,7 
2 196,9 ± 3,5 360,8 ± 5,6 670,4 ± 8,9 
2,5 270,8 ± 4,6 457,2 ± 7,0 750,3 ± 11,7 
3 354,6 ± 5,1 565,6 ± 9,1 825,7 ± 11,9 
4 457,2 ± 6,9 670,8 ± 7,5 879,2 ± 15,1 
5 553,8 ± 7,7 732,7 ± 8,2 935,8 ± 14,8 
6 601,5 ± 7, 5 780,6 ± 8,8 987,3 ± 15,6 
Phụ lục 5.6. Nồng độ piroxicam trong trong thủy dịch mắt thỏ 
sau khi nhỏ hỗn dịch nano polyme và hỗn dịch nano tinh thể 0,5% (n 6) 
Thời gian 
(phút) 
Nồng độ piroxicam trong thủy dịch mắt thỏ (ng/ml) 
Hỗn dịch nano polyme Hỗn dịchn no nh hể 
0 0 0 
5 925,85 ± 66,73 170,80 ± 5,13 
10 2103,14 ± 476,60 304,40 ± 5,30 
15 2998,75 ± 390,05 2488,77 ± 50,33 
20 3609,36 ± 235,83 3425,15 ± 36,06 
25 4902,13 ± 842,84 6194,39 ± 70,95 
30 7058,06 ± 399,57 3155,99 ± 48,75 
45 5456,73 ± 319,79 1376,70 ± 51,73 
60 3515,44 ± 331,46 883,60 ± 15,01 
120 1963,72 ± 252,95 226,5423 ± 5,03 
180 1066,58 ± 163,91 - 
(-): n ng độ piroxicam thấp hơn giới hạn định lượng dưới