Luận án Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng và đánh giá khả năng phân bố sinh học của paclitaxel từ chế phẩm thuốc tiêm sản xuất tại Việt Nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ 
ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH 
NGUYỄN THANH HÀ 
XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG VÀ ĐÁNH GIÁ 
KHẢ NĂNG PHÂN BỐ SINH HỌC CỦA PACLITAXEL TỪ 
CHẾ PHẨM THUỐC TIÊM SẢN XUẤT TẠI VIỆT NAM 
LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC 
TP. HỒ CHÍ MINH - NĂM 2020 
TP.HỒ CHÍ MINH, Năm 2020
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ 
ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH 
NGUYỄN THANH HÀ 
XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG VÀ ĐÁNH GIÁ 
KHẢ NĂNG PHÂN BỐ SINH HỌC CỦA PACLITAXEL TỪ 
CHẾ PHẨM THUỐC TIÊM SẢN XUẤT TẠI VIỆT NAM 
NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT 
MÃ SỐ: 62720410 
LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC 
NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: 
1. PGS. TS. LÊ MINH TRÍ 
 2. PGS.TS. NGUYỄN THIỆN HẢI 
TP.HỒ CHÍ MINH, Năm 2020 
i 
LỜI CAM ĐOAN 
Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu 
được trình bày trong luận án là trung thực, khách quan và chưa từng được công bố ở 
bất kỳ nơi nào. 
 Tác giả luận án 
 Nguyễn Thanh Hà 
ii 
MỤC LỤC 
 Trang 
LỜI CAM ĐOAN i 
DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ THUẬT NGỮ ANH VIỆT iv 
DANH MỤC CÁC BẢNG vi 
DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ x 
MỞ ĐẦU 1 
Chương 1. TỔNG QUAN 
1.1. PACLITAXEL 
1.2. ĐỊNH HƯỚNG CẢI TIẾN CÔNG THỨC BÀO CHẾ THUỐC TIÊM 
PACLITAXEL 
3 
3 
5 
1.3. HYDROXYPROPYL-β-CYCLODEXTRIN 13 
1.4. KIỂM NGHIỆM THUỐC TIÊM DẠNG DUNG DỊCH ĐẬM ĐẶC VÀ 
BỘT ĐÔNG KHÔ - KHẢO SÁT ĐỘ ỔN ĐỊNH 
1.5. NGHIÊN CỨU TIỀN LÂM SÀNG 
1.6. MỘT SỐ CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU 
16 
17 
19 
Chương 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 
2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 
2.2. NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ 
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 
27 
27 
27 
29 
Chương 3. KẾT QUẢ 
3.1 XÂY DỰNG CÔNG THỨC VÀ QUY TRÌNH ĐIỀU CHẾ THUỐC 
TIÊM CHỨA PTX VỚI HAI DẠNG BÀO CHẾ DUNG DỊCH ĐẬM ĐẶC 
VÀ BỘT ĐÔNG KHÔ PHA TIÊM TRUYỀN 
3.2. XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘ ỔN 
ĐỊNH CỦA HAI CHẾ PHẨM NGHIÊN CỨU 
3.3. NGHIÊN CỨU THÔNG SỐ DƯỢC ĐỘNG HỌC VÀ ĐÁNH GIÁ 
PHÂN BỐ SINH HỌC TRONG MỘT SỐ MÔ ĐỘNG VẬT THỬ NGHIỆM 
48 
48 
60 
69 
iii 
CỦA HAI CHẾ PHẨM BÀO CHẾ CHỨA PTX SO VỚI CHẾ PHẨM ĐỐI 
CHỨNG 
Chương 4. BÀN LUẬN 
4.1. BÀO CHẾ THUỐC TIÊM CHỨA PTX DẠNG DUNG DỊCH ĐẬM 
ĐẶC VÀ BỘT ĐÔNG KHÔ 
4.2. TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG VÀ ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA CHẾ PHẨM 
PHA TIÊM CHỨA PTX 
4.3. NGHIÊN CỨU THÔNG SỐ DƯỢC ĐỘNG HỌC VA ĐÁNH GIÁ 
PHÂN BỐ SINH HỌC TRONG MỘT SỐ MÔ CỦA HAI DẠNG BÀO CHẾ 
SO VỚI THUỐC ĐỐI CHỨNG 
ĐIỂM MỚI CỦA ĐỀ TÀI 
103 
103 
107 
108 
118 
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 119 
DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN 
TÀI LIỆU THAM KHẢO 
PHỤ LỤC 
122 
iv 
DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ THUẬT NGỮ ANH VIỆT 
Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt 
BCS Biopharmaceutical classification 
system 
Hệ thống phân loại sinh 
dược phẩm 
LBMW lecithin: butanol: myvacet: nước 
CMW capmul: myvacet: nước 
CyD Cylodextrin 
HP- β-CyD Hydroxylpropyl-β- Cylodextrin 
PVP K30 Polyvinylpyrrolidone K30 
Polysorbate Polyoxyethylene sorbitan 
monooleate 
HPMC Hydroxypropyl methylcellulose 
API Active Pharmaceutical Ingredients Dược chất 
FPP Finished Pharmaceutical Product Thành phẩm 
MTD Maximal tolerated dose Liều dung nạp tối đa 
LD50 Lethal Dose 50 
Liều gây chết 50% thú 
thử nghiệm 
LD100 Lethal Dose 100 Liều gây chết 100% thú 
thử nghiệm 
LDo 
AUC 
Lethal Dose 0 
Area under curve 
Liều thử nghiệm 
Diện tích dưới đường 
cong 
Tmax Thời gian để đạt được 
nồng độ tối đa 
Cmax Nồng độ tối đa trong 
huyết tương 
AS Analyst substance Chất chuẩn 
IS Internal substance Nội chuẩn 
v 
HPLC High Performance Liquid 
Chromatography 
Sắc ký lỏng hiệu năng 
cao 
M Khối lượng phân tử 
N Số đĩa lý thuyết 
k’ Hệ số dung lượng 
As Hệ số bất đối 
LLE 
LLOQ 
 Liquid–Liquid Extraction 
 Lower Limit of Quantitation 
Chiết lỏng – lỏng 
Giới hạn định lượng 
dưới 
PTX 
CAR 
DZP 
Paclitaxel 
Carbamazepin 
Diazepam 
RSD 
Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương 
đối 
Rt Retention time Thời gian lưu 
SD Standard deviation Độ lệch chuẩn 
SPE Solid Phase Extraction Chiết pha rắn 
RH Relative humidity Độ ẩm tương đối 
K/E Kolliphor/ Ethanol Dung dịch K 
T80/E Tween 80/ Ethanol Dung dịch T 
A Acid citric 
vi 
DANH MỤC CÁC BẢNG 
 Trang 
Bảng 1.1. Giới hạn tạp chất trong chế phẩm PTX dùng đường tiêm 5 
Bảng 1.2. Các yếu tố dung môi và tá dược khảo sát trong bào chế dạng 
đông khô 
11 
Bảng 1.3. Một số hệ đệm dùng trong công thức đông khô 12 
Bảng 1.4. Tính chất lý hóa của một số dẫn xuất CyD trong dược phẩm 14 
Bảng 1.5. Một số chế phẩm thuốc tiêm có chứa cyclodextrin 15 
Bảng 1.6. Phân loại vùng và điều kiện bảo quản 17 
Bảng 1.7. Thông số áp dụng trong thẩm định quy trình định lượng dược 
chất trong dịch sinh học 
19 
Bảng 1.8. Giá trị AUC0-8h của Taxol® khi tiêm cho chuột với liều 15 
mg/kg 
23 
Bảng 1.9. Giá trị AUC0-8h (µg/g.giờ) của PTX hỗn dịch sau khi tiêm với 
liều 15 mg/kg 
23 
Bảng 1.10. Giá trị AUC0-12h của PTX hỗn dịch sau khi tiêm liều với 10 
mg/kg 
25 
Bảng 2.1. Thông tin thuốc đối chứng 27 
Bảng 2.2. Thông tin về động vật thí nghiệm 27 
Bảng 2.3. Thông tin chuẩn đối chiếu 27 
Bảng 2.4. Hóa chất, dung môi 28 
Bảng 2.5. Trang thiết bị dùng trong bào chế và kiểm nghiệm 29 
Bảng 2.6. Tỷ lệ và thành phần các công thức khảo sát 31 
Bảng 2.7. Thành phần công thức bột đông khô khảo sát 32 
Bảng 2.8. Điều kiện bảo quản mẫu, đánh giá độ ổn định và thời điểm 
lấy mẫu 
38 
Bảng 2.9. Liều tiêm và thời điểm lấy máu động vật thí nghiệm 40 
Bảng 2.10. Liều tiêm và thời điểm lấy mẫu mô động vật thí nghiệm 40 
vii 
Bảng 3.1. Kết quả định lượng PTX (%) các dung dịch (S) sau khi pha 
loãng từ Stragen® trong dung dịch NaCl 0,9% và glucose 5% 
48 
Bảng 3.2. Kết quả cảm quan và hàm lượng PTX (%) các dung dịch sau 
khi pha loãng 10 lần từ dung dịch đậm đặc trong NaCl 0,9% 
49 
Bảng 3.3. Kết quả cảm quan và hàm lượng PTX (%) các dung dịch sau 
khi pha loãng 10 lần từ dung dịch đậm đặc trong glucose 5% 
49 
Bảng 3.4. Kết quả khảo sát ảnh hưởng của acid citric đến cảm quan và 
hàm lượng PTX (%) các dung dịch sau khi pha loãng ở các nồng độ trị 
liệu trong NaCl 0,9% 
50 
Bảng 3.5. Kết quả khảo sát ảnh hưởng của acid citric đến cảm quan và 
hàm lượng PTX (%) các dung dịch sau khi pha loãng ở các nồng độ trị 
liệu trong glucose 5% 
51 
Bảng 3.6. Kết quả cảm quan và định lượng PTX (%) các dung dịch có 
acid citric sau khi pha loãng trong dung dịch NaCl 0,9% và glucose 5% 
52 
Bảng 3.7. Kết quả về cảm quan, pH, hàm lượng PTX, tạp liên quan, nội 
độc tố, độ vô khuẩn của chế phẩm 
53 
Bảng 3.8. Tỷ lệ PVP K30 sử dụng 54 
Bảng 3.9. Kết quả đánh giá cảm quan dung dịch đậm đặc 55 
Bảng 3.10. Kết quả pH và hàm lượng PTX (%) từ các công thức khảo 
sát 
57 
Bảng 3.11. Kết quả khảo sát lặp lại lô bột đông khô pha tiêm 58 
Bảng 3.12. Kết quả về cảm quan, pH, hàm lượng PTX, tạp liên quan, nội 
độc tố, độ vô khuẩn của chế phẩm bột đông khô 
60 
Bảng 3.13. Điều kiện sắc ký của phương pháp định lượng PTX và tạp 
liên quan 
58 
Bảng 3.14. Kết quả thẩm định tính phù hợp hệ thống của mẫu chuẩn và 
mẫu thử dung dịch đậm đặc và bột đông khô trong phương pháp định 
lượng PTX 
61 
viii 
Bảng 3.15. Kết quả độ đúng phương pháp định lượng PTX trong chế 
phẩm 
62 
Bảng 3.16. Kết quả thẩm định độ chính xác phương pháp định lượng 
PTX 
63 
Bảng 3.17. Điều kiện sắc ký của phương pháp định lượng tạp trong chế 
phẩm 
63 
Bảng 3.18. Kết quả thẩm định tính phù hợp hệ thống của tạp chuẩn 10-
DAP và chuẩn PTX của phương pháp định lượng tạp 
65 
Bảng 3.19. Kết quả thẩm định độ chính xác phương pháp định lượng tạp 66 
Bảng 3.20. Kết quả pH, đồng đều khối lượng, hàm lượng nước, định 
lượng và tạp liên quan của chế phẩm bột đông khô chứa PTX 
67 
Bảng 3.21. Kết quả độ ổn định của chế phẩm dung dịch đậm đặc và bột 
đông khô pha tiêm truyền chứa PTX ở điều kiện bảo quản dài hạn 
68 
Bảng 3.22. Kết quả độ ổn định của chế phẩm dung dịch đậm đặc và đông 
khô pha tiêm truyền chứa PTX ở điều kiện lão hóa cấp tốc 
69 
Bảng 3.23. Kết quả dữ liệu thăm dò liều thử độc tính cấp dung dịch đậm 
đặc, bột đông khô pha tiêm truyền chứa PTX và thuốc đối chứng 
Anzatax® 
70 
Bảng 3.24. Kết quả thẩm định tính phù hợp hệ thống của phương pháp 
định lượng PTX trong huyết tương thỏ và chuột 
75 
Bảng 3.25. Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính, LLOQ, độ chính xác và 
độ đúng 
75 
Bảng 3.26. Kết quả thẩm định tỷ lệ thu hồi và hiệu suất chiết CAR và 
PTX trong huyết tương thỏ và huyết tương chuột 
76 
Bảng 3.27. Kết quả thẩm định độ ổn định của PTX trong huyết tương thỏ 
và chuột 
77 
Bảng 3.28. Kết quả thẩm định độ ổn định ngắn hạn và dài hạn của dung 
dịch chuẩn 
77 
ix 
Bảng 3.29. Kết quả thẩm định tính phù hợp hệ thống phương pháp định 
lượng PTX trong dịch chiết mô đồng nhất thỏ và chuột 
83 
Bảng 3.30. Kết quả thẩm định tính tuyến tính trong phương pháp định 
lượng PTX trong dịch chiết mô gan thỏ 
83 
Bảng 3.31. Kết quả thẩm định tính tuyến tính trong phương pháp định 
lượng PTX trong dịch chiết từ mô thận thỏ 
84 
Bảng 3.32. Kết quả thẩm định tính tuyến tính trong phương pháp định 
lượng PTX trong dịch chiết từ mô phổi thỏ 
84 
Bảng 3.33. Kết quả thẩm định tính tuyến tính trong phương pháp định 
lượng PTX trong dịch chiết từ mô buồng trứng thỏ 
85 
Bảng 3.34. Kết quả thẩm định tính tuyến tính trong phương pháp định 
lượng PTX trong dịch chiết mô gan chuột 
85 
Bảng 3.35. Kết quả thẩm định tính tuyến tính trong phương pháp định 
lượng PTX trong dịch chiết mô thận chuột 
86 
Bảng 3.36. Kết quả thẩm định tính tuyến tính trong phương pháp định 
lượng PTX trong dịch chiết mô phổi chuột 
86 
Bảng 3.37. Kết quả thẩm định tỷ lệ thu hồi và hiệu suất chiết PTX và 
CAR/DZP từ dịch chiết mô đồng nhất thỏ và chuột 
87 
Bảng 3.38. Kết quả thẩm định độ đúng và độ chính xác phương pháp 
định lượng PTX trong dịch chiết mô thỏ 
87 
Bảng 3.39. Kết quả thẩm định độ đúng và độ chính xác tại LLOQ phương 
pháp định lượng PTX trong dịch chiết mô thỏ 
88 
Bảng 3.40. Kết quả thẩm định độ đúng và độ chính xác phương pháp 
định lượng PTX trong mô chuột 
88 
Bảng 3.41. Kết quả thẩm định độ đúng và độ chính xác tại LLOQ phương 
pháp định lượng PTX trong mô chuột 
89 
Bảng 3.42. Kết quả thẩm định độ ổn định PTX trong dịch chiết từ mô 
thỏ ở các điều kiện bảo quản 
89 
x 
Bảng 3.43. Kết quả thẩm định độ ổn định PTX trong dịch chiết từ mô 
chuột 
90 
Bảng 3.44. Kết quả khảo sát nồng độ PTX (µg/ mL) trong huyết tương 
thỏ sau khi tiêm thuốc đối chứng Stragen®, dung dịch đậm đặc và bột 
đông khô 
91 
Bảng 3.45. So sánh các thông số dược động học trong huyết tương thỏ 
của thuốc đối chứng với chế phẩm dung dịch đậm đặc và bột đông khô 
93 
Bảng 3.46. Bảng so sánh nồng độ PTX tại từng thời điểm giữa chế phẩm 
bào chế và thuốc đối chiếu Anzatax® 
94 
Bảng 3.47. Bảng so sánh các thông số dược động học giữa chế phẩm bào 
chế và thuốc đối chiếu Anzatax® 
94 
Bảng 3.48. Nồng độ PTX (µg/ g) trong mô thỏ (TB ± SD) của thuốc đối 
chứng (A) 
95 
Bảng 3.49. Nồng độ PTX (µg/g) (TB ± SD) trong các mô thỏ 96 
Bảng 3.50. So sánh AUC0,5-8h của PTX trong mô thỏ giữa thuốc đối 
chứng và dung dịch đậm đặc (TB ± SD) 
98 
Bảng 3.51. Nồng độ PTX (µg/g) (TB ± SD) trong mô chuột của thuốc 
đối chứng 
98 
Bảng 3.52. Nồng độ PTX (µg/ g) (TB ± SD) trong mô khi tiêm dung dịch 
đậm đặc 
99 
Bảng 3.53. So sánh AUC0-8h của PTX trong mô chuột giữa thuốc đối 
chứng và dung dịch đậm đặc với liều 12 mg/kg (TB ± SD) 
102 
x 
DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ 
Trang 
Hình 1.1. Công thức cấu tạo paclitaxel 3 
Hình 1.2. Tổng quát hướng nghiên cứu cải thiện độ tan paclitaxel 6 
Hình 1.3. Giản đồ pha áp suất-nhiệt độ của một chất, điểm tới hạn khí-
lỏng (vapor-liquid critical point) 
11 
Hình 1.4. Cấu trúc β-CyD và các dẫn xuất 14 
Hình 1.5. So sánh phân bố của PTX trong một số mô chuột thử 
nghiệm giữa chế phẩm Taxol® và DOMC-FA/PTX 
24 
Hình 1.6. Đồ thị phân bố nồng độ PTX trong mô theo thời gian 25 
Hình 3.1. Sơ đồ quy trình pha chế dung dịch đậm đặc chứa PTX quy 
mô 50 lọ 
53 
Hình 3.2. Quy trình bào chế dạng bột đông khô pha tiêm chứa PTX 59 
Hình 3.3. Sắc ký đồ của mẫu chuẩn PTX, mẫu placebo, mẫu thử của 
dung dịch đậm đặc (a) và bột đông khô (b) 
61 
Hình 3.4. Đồ thị biểu diễn mối tương quan giữa nồng độ và diện tích 
đỉnh của phương pháp định lượng PTX trong chế phẩm 
62 
Hình 3.5. Sắc ký đồ tạp chuẩn 10-DAP (a) và hỗn hợp PTX-tạp chuẩn 
10-DAP (b) 
64 
Hình 3.6. Sắc ký đồ mẫu placebo, mẫu thử của dung dịch đậm đặc (a1, 
a2) và bột đông khô (b1, b2) 
64 
Hình 3.7. Đồ thị tỷ lệ % chết theo tần số tích lũy của thuốc đối chứng, 
dung dịch đậm đặc và bột đông khô tiêm truyền chứa PTX. 
71 
Hình 3.8. (a) Sắc ký đồ của mẫu placebo, (b) CAR nồng độ 4 µg/mL 
trong methanol, (c) PTX nồng độ 25 µg/mL trong methanol 
73 
Hình 3.9. (d) Sắc kí đồ PTX nồng độ 50 µg/mL (e) hỗn hợp 4 µg CAR/ 
mL và 25 µg PTX/ mL, (f) hỗn hợp 4 µg CAR/ mL và 50 µg PTX/ mL 
trong huyết tương thỏ 
74 
Hình 3.10. Sắc ký đồ PTX và CAR trong mẫu placebo (a), mẫu huyết 
tương chuột chứa CAR 1 µg/mL (b), PTX 10 µg/mL (c) và hỗn hợp (d) 
74 
xi 
Hình 3.11. Sắc ký đồ mẫu placebo các mô buồng trứng, gan, phổi, thận 
của thỏ 
79 
Hình 3.12. Sắc ký đồ PTX và CAR trong mô thỏ 
(a) Sắc ký đồ chuẩn PTX và nội chuẩn CAR trong methanol,(b) chuẩn 
PTX và nội chuẩn CAR trong mẫu thử tự tạo, (c) mẫu mô phổi tại thời 
điểm 0,5 giờ sau khi cho thỏ dùng thuốc với liều 6 mg/kg. 
80 
Hình 3.13. Sắc ký đồ chuẩn PTX và DZP trong methanol (a), trong mẫu 
thử tự tạo mô đồng nhất (b) và mẫu mô sau khi tiêm thuốc 1 giờ (c) 
81 
Hình 3.14. Sắc ký đồ mẫu placebo từ dịch chiết các mô gan, thận, phổi 
của chuột 
82 
Hình 3.15. Biểu đồ nồng độ thuốc PTX của thuốc đối chứng (1), dung 
dịch đậm đặc (2) và bột đông khô (3) trong huyết tương thỏ theo thời 
gian 
92 
Hình 3.16. Biểu đồ nồng độ PTX trung bình của thuốc đối chứng (1) và 
dung dịch đậm đặc (2) trong huyết tương chuột nhắt theo thời gian 
94 
Hình 3.17. Đường biểu diễn nồng độ PTX trong các mô theo thời gian 
sau khi tiêm tĩnh mạch thuốc đối chứng (A) với liều 6 mg/kg (TB ± SD) 
96 
Hình 3.18. Đường biểu diễn nồng độ PTX trong các mô theo thời gian 
sau khi tiêm tĩnh mạch dung dịch đậm đặc (B) với liều 6 mg/kg (TB ± 
SD) 
96 
Hình 3.19. Phân bố trong mô của PTX sau khi tiêm tĩnh mạch liều 6 
mg/kg thuốc đối chứng (A) và dung dịch đậm đặc (B) trên thỏ thử 
nghiệm (TB ± SD) 
97 
Hình 3.20. Đường biểu diễn nồng độ PTX (TB ± SD) trong mô chuột 
theo thời gian khi tiêm thuốc đối chứng 
99 
Hình 3.21. Đường biểu diễn nồng độ PTX trong mô chuột theo thời 
gian sau khi tiêm dung dịch đậm đặc (TB ± SD) 
100 
Hình 3.22. So sánh phân bố PTX (µg/ g) trong mô gan (a), thận (b), 
phổi (c) của chuột sau khi tiêm thuốc đối chứng và chế phẩm thử dung 
dịch đậm đặc chứa PTX 
101 
1 
MỞ ĐẦU 
 Paclitaxel (PTX), hoạt chất chiết từ vỏ cây thông đỏ (Taxus brevifolia) với 
những nghiên cứu ban đầu những  ... 
986755 103,89 
975154 102,66 
Trung bình 102,94 
RSD (%) 1,01 
Quy trình định lượng PTX có tỷ lệ hồi phục trong khoảng 96,41 - 111,14%. 
RSD tương ứng với các mức nồng độ thấp, trung bình, cao là 3,3%; 4,17%, 1,01%. Đạt 
yêu cầu (< 15%). 
2.1.4. Độ đúng và độ chính xác 
Độ đúng và độ chính xác được thực hiện trong mô đồng nhất. Chọn 3 nồng độ 20, 10 , 1 
µg/mL tương ứng với 3 mức nồng độ cao, trung bình, thấp theo đường chuẩn tuyến tính. 
Mỗi nồng độ 5 mẫu, định lượng trong 3 ngày để xác định độ đúng và độ chính xác trong 
ngày và liên ngày. 
PL-66 
Ngày 1 Ngày 2 Ngày 3 
Nồng độ 
PTX thực 
tế 
(µg/mL) 
Nồng độ tìm 
thấy 
Tỷ lệ hồi 
phục % 
% Độ 
lệch 
Nồng 
độ PTX 
thực tế 
(µg/mL) 
Nồng độ tìm 
thấy 
Tỷ lệ hồi 
phục % 
% Độ 
lệch 
Nồng 
độ PTX 
thực tế 
(µg/mL) 
Nồng độ tìm 
thấy 
Tỷ lệ hồi 
phục % 
% Độ 
lệch 
1,002 
1,025 102,28 0,74 
1,002 
0,971 96,88 2,85 
0,982 
0,849 86,48 1,86 
1,026 102,37 0,66 1,079 107,66 8,08 0,864 87,96 0,18 
0,981 97,95 4,95 1,014 101,25 1,58 0,876 89,17 1,19 
1,075 107,28 4,11 0,981 97,95 1,76 0,880 89,59 1,67 
1,056 105,35 2,24 0,999 99,69 0,00 0,858 87,39 0,82 
Trung 
bình 103,05 2,54 100,69 2,85 88,12 1,14 
RSD% 3,44 4,21 1,45 
10,02 
10,470 104,49 2,58 
10,02 
10,634 106,13 0,66 
9,82 
9,425 95,98 1,77 
10,045 100,25 1,59 10,464 104,43 0,96 9,155 93,23 1,15 
10,490 104,69 2,78 10,515 104,95 0,47 9,349 95,20 0,95 
9,992 99,72 2,10 10,639 106,18 0,70 9,154 93,22 1,15 
10,036 100,16 1,68 10,572 105,51 0,07 9,222 93,91 0,42 
Trung 
bình 101,86 2,14 105,44 0,57 94,31 1,09 
RSD% 2,46 0,72 1,31 
20,04 
20,157 97,14 1,81 
20,04 
19,467 97,14 1,81 
19,64 
19,423 98,89 0,38 
19,935 103,58 4,70 20,758 103,58 4,70 19,160 97,55 0,98 
19,421 100,18 1,27 20,076 100,18 1,26 19,468 99,12 0,61 
20,200 96,91 2,04 19,421 96,91 2,04 19,404 98,80 0,29 
19,524 96,83 2,12 19,404 96,83 2,12 19,289 98,22 0,31 
Trung 
bình 98,93 2,39 98,93 2,39 98,52 0,51 
RSD% 2,99 2,99 0,64 
Bảng PL11.30. Bảng số liệu thẩm định độ đúng và độ chính xác trong ngày và liên ngày 
PL-67 
2.1.5. Giới hạn định lượng dưới (LLOQ) 
Bảng PL11.31. Bảng số liệu thẩm định độ đúng và độ chính xác tại nồng độ LLOQ 
2.2. KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH TRÊN CHUỘT 
2.2.1. Tính phù hợp hệ thống 
Bảng PL11.32. Số liệu thẩm định tính phù hợp hệ thống 
N 
IS AS 
Rt Diện tích k’ As Rt Diện tích k’ As 
1 8,257 721559 0,522 1,352 10,186 529557 0,234 1,065 
2 8,253 720561 0,521 1,351 10,189 531612 0,235 1,066 
3 8,256 720345 0,521 1,349 10,185 529973 0,234 1,061 
4 8,260 719857 0,522 1,351 10,188 529125 0,234 1,060 
5 8,257 720104 0,521 1,348 10,179 532986 0,234 1,057 
6 8,258 720378 0,521 1,354 10,181 530768 0,235 1,064 
TB 8,257 720467 0,521 1,351 10.185 530670 0,234 1,062 
SD 0,002 587,873 0,000 0,002 0,004 1440,307 0,001 0,003 
RSD% 0,03 0,08 0,09 0,16 0,04 0,27 0,22 0,32 
Yêu cầu RSD ≤ 2% 
Kết luận Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt Đạt 
2.2.2. Tính tuyến tính & miền giá trị 
• Tính tuyến tính trong mô gan 
Thứ tự 
mẫu 
Diện tích pic 
AS/IS1 
Nồng độ 
PTX thực 
tế (µg/mL) 
Nồng độ 
PTX tìm 
thấy 
(µg/mL) 
Tỷ lệ hồi 
phục % 
Độ lệch 
% 
AS IS1 
1 4092 174951 0,0234 
0,1018 
0,1055 103,59 3,59 
2 3996 172770 0,0231 0,1043 102,43 2,43 
3 4193 172590 0,0242 0,1095 107,60 7,60 
4 3636 168357 0,0215 0,0974 95,65 4,35 
5 3969 167950 0,0236 0,1065 104,66 4,66 
6 3621 166433 0,0218 0,0981 96,36 3,64 
PL-68 
Hình PL11.9. Đường biểu diễn nồng độ PTX (𝛍𝐠/mL) theo tỷ số AS/IS trong mô gan 
Đường chuẩn tuyến tính trong mô gan: y = 8,255x – 0,028, R2 = 0,9996 
F = 16127,43 > F (0,05;6) = 5,59 : Phương trình hồi quy tương thích có độ tin cậy 95%. 
Ta = 126,99 > t(0,05;6) = 2,37: Hệ số a có ý nghĩa thống kê. 
Tb = -0,42 < t(0,05;6) = 2.37: Hệ số b không có ý nghĩa thống kê. 
Phương trình hồi quy có thể viết lại : y = 8,255x. 
Bảng PL11.33. Số liệu thẩm định tuyến tính trong mô gan 
Độ lệch tại LLOQ là 9,85% nhỏ hơn 20%, tại các điểm khác đều nhỏ hơn 15%. Do 
đó chấp nhận đường chuẩn trong mô gan. 
• Tính tuyến tính trong mô thận 
y = 8,255x - 0,028
R² = 0,999
0
5
10
15
20
25
0 1 2 3
N
ồ
n
g 
đ
ộ
 P
TX
AS/IS
Nồng độ 
PTX 
thực tế 
(𝛍𝐠/mL) 
Diện tích pic 
Nồng độ 
PTX từ 
đường 
chuẩn 
(𝛍𝐠/mL) 
Độ 
lệch 
(%) 
Yêu cầu 
Kết 
luận 
AS IS2 AS/IS2 
0,1 7605 696389 0,0109 0,0901 9,85 Độ lệch ≤ 20% Đạt 
0,5 41621 728650 0,0571 0,4715 5,69 
Độ lệch ≤ 15% 
Đạt 
1 86294 778074 0,1109 0,9155 8,45 Đạt 
2,5 226993 766240 0,2962 2,4455 2,18 Đạt 
5 472521 749725 0,6303 5,2028 4,06 Đạt 
7,5 659646 713658 0,9243 7,6302 1,74 Đạt 
10 918720 743671 1,2354 10,1981 1,98 Đạt 
20 1761279 731610 2,4074 19,8731 0,63 Đạt 
PL-69 
Hình PL11.10. Đường biểu diễn nồng độ PTX µg/ mL theo tỷ số AS/IS trong mô thận 
Đường chuẩn tuyến tính trong mô thận: y = 8,809x – 0,099, R2 = 0,9991 
F = 7557,78 > F (0,05;6) = 5,59 : Phương trình hồi quy tương thích có độ tin cậy 95%. 
Ta = 86,94 > t(0,05;6) = 2,37: Hệ số a có ý nghĩa thống kê. 
Tb = -1,00 < t(0,05;6) = 2,37: Hệ số b không có ý nghĩa thống kê. 
Phương trình hồi quy có thể viết lại : y = 8,809x. 
Bảng PL11.34. Số liệu thẩm định trong mô thận 
Độ lệch tại LLOQ là 9,23% nhỏ hơn 20%, tại các điểm khác đều nhỏ hơn 15%. Do 
đó chấp nhận đường chuẩn trong mô thận. 
• Tính tuyến tính trong mô phổi 
y = 8,809x - 0,099
R² = 0,999
0
5
10
15
20
25
0 0.5 1 1.5 2 2.5
N
ồ
n
g 
đ
ộ
 P
TX
AS/IS
Nồng độ 
PTX 
thực tế 
(𝛍𝐠/mL) 
Diện tích pic Nồng độ PTX 
từ đường 
chuẩn 
(𝛍𝐠/m) 
Độ 
lệch 
(%) 
Yêu cầu 
Kết 
luận 
AS IS2 AS/IS2 
0,1 9602 775872 0,0124 0,1092 9,23 Độ lệch ≤ 20% Đạt 
0,5 47501 751916 0,0632 0,5567 11,35 
Độ lệch ≤ 15% 
Đạt 
1 86139 719504 0,1197 1,0544 5,44 Đạt 
2,5 226788 758913 0,2988 2,6321 5,29 Đạt 
5 452856 767014 0,5904 5,2008 4,02 Đạt 
7,5 691838 764804 0,9046 7,9686 6,25 Đạt 
10 863481 776394 1,1122 9,7974 2,03 Đạt 
20 1830632 803478 2,2784 20,0704 0,35 Đạt 
PL-70 
Hình PL11.11.Đường biểu diễn nồng độ PTX (𝛍𝐠/ml) theo tỷ số AS/IS trong mô phổi 
Đường chuẩn tuyến tính trong mô phổi: y = 8,581x - 0.157, R2 = 0,9995 
F = 10811,38 > F (0,05;6) = 5,59 : Phương trình hồi quy tương thích có độ tin cậy 95%. 
Ta = 103,98 > t(0,05;6) = 2,37: Hệ số a có ý nghĩa thống kê. 
Tb = -1,88 < t(0,05;6) = 2,37: Hệ số b không có ý nghĩa thống kê. 
Phương trình hồi quy có thể viết lại : y = 8,581x. 
Bảng PL11.35. Thống kê số liệu tuyến tính trong mô phổi 
Độ lệch tại LLOQ là 13,75% nhỏ hơn 20%, tại các điểm khác đều nhỏ hơn 15%. 6/8 
điểm đạt yêu cầu độ lệch trong đó có LLOQ và điểm giới hạn trên. Do đó chấp nhận 
đường chuẩn trong mô phổi. 
y = 8,581x - 0,157
R² = 0,999
-5
0
5
10
15
20
25
0.0000 0.5000 1.0000 1.5000 2.0000 2.5000
N
ồ
n
g 
đ
ộ
 P
TX
AS/IS
Nồng độ 
PTX 
thực tế 
(𝛍𝐠/mL) 
Diện tích pic 
Nồng độ 
PTX từ 
đường 
chuẩn 
(𝛍𝐠/mL) 
Độ 
lệch 
(%) 
Yêu cầu Kết luận 
AS IS AS/IS 
0,1 726480 9630 0,0146 0,1137 13,75 Độ lệch ≤ 20% Đạt 
0,5 711005 52235 0,0735 0,6304 26,08 
Độ lệch ≤ 15% 
Không Đạt 
1 756800 92005 0,1216 1,0432 4,32 Đạt 
2,5 755280 257232 0,3406 2,9225 16,90 Không Đạt 
5 748564 458783 0,6129 5,2592 5,18 Đạt 
7,5 746210 677242 0,9076 7,7879 3,84 Đạt 
10 765883 887880 1,1593 9,9479 0,52 Đạt 
20 778579 1828482 2,3485 20,1524 0,76 Đạt 
PL-71 
2.2.3. Tỷ lệ phục hồi và hiệu suất chiết PTX 
Bảng PL11.36. Số liệu thẩm định tỷ lệ hồi phục PTX 
Nồng độ PTX thực tế 
(𝛍𝐠/𝐦𝐋) 
Diện tích pic 
PTX trong mô 
Diện tích pic PTX 
trong methanol 
Tỷ lệ hồi phục 
(%) 
1 
87913 
94028 
93,50 
86194 91,67 
81176 86,33 
85599 91,04 
84497 89,86 
Trung bình 90,48 
RSD (%) 2,95 
5 
452783 
511713 
88,48 
495493 96,83 
505672 98,82 
510683 99,80 
458416 89,58 
Trung bình 94,70 
RSD (%) 5,60 
10 
891492 
998576 
89,28 
876452 87,77 
924625 92,59 
857675 85,89 
886135 88,74 
Trung bình 88,85 
RSD (%) 2,76 
Quy trình định lượng PTX có tỷ lệ hồi phục trong khoảng 87,77-99,08%, các giá trị 
nằm trong khoảng 85-115%. RSD tương ứng với các mức nồng độ thấp, trung bình, 
cao là 2,95%; 5,60%; 2,76%. Đạt yêu cầu về độ đúng và độ chính xác khi nhỏ hơn 
15%. 
PL-72 
2.2.4. Tỷ lệ phục hồi và hiệu suất chiết diazepam (DZP) 
Bảng PL11.37. Số liệu thẩm định tỷ lệ phục hồi DZP 
Nồng độ DZP thực tế 
(𝛍𝐠/𝐦𝐋) 
Diện tích pic 
DZP trong mô 
Diện tích pic DZP 
trong methanol 
Tỷ lệ hồi phục 
(%) 
2 
735194 
744378 
98,77 
732503 98,40 
716614 96,27 
714529 95,99 
711239 95,55 
Trung bình 97,00 
RSD (%) 1,53 
2 
669682 
718819 
93,16 
686157 95,46 
682317 94,92 
733949 102,10 
634394 88,26 
Trung bình 94,78 
RSD (%) 5,26 
2 
734447 
751868 
97,68 
693432 92,23 
749989 99,75 
740915 98,54 
724050 96,30 
Trung bình 96,90 
RSD (%) 2,99 
Quy trình định lượng DZP có tỷ lệ hồi phục trong khoảng 88,26-102,10%, các giá trị 
nằm trong khoảng 85-115%. RSD tương ứng với các mức nồng độ thấp, trung bình, 
cao là 1,53%; 5,26%; 2,99%. Đạt yêu cầu về độ đúng và độ chính xác khi nhỏ hơn 
15%. 
PL-73 
2.2.5. Độ đúng và độ chính xác 
Bảng PL11.38. Bảng số liệu thẩm định độ đúng và độ chính xác trong ngày và liên ngày 
Nồng độ 
PTX thực tế 
(𝛍g/ml) 
Ngày 1 Ngày 2 Ngày 3 
Nồng độ 
tìm thấy 
Tỷ lệ hồi 
phục (%) 
Độ lệch 
(%) 
Nồng độ 
tìm thấy 
Tỷ lệ hồi 
phục (%) 
Độ lệch 
(%) 
Nồng độ 
tìm thấy 
Tỷ lệ hồi 
phục (%) 
Độ lệch 
(%) 
1 
0,9871 98,71 1,29 0,9497 94,97 5,03 1,0029 100,29 0,29 
0,9714 97,14 2,86 0,9126 91,26 8,74 1,0248 102,48 2,48 
0,9351 93,51 6,49 0,9712 97,12 2,88 1,0152 101,52 1,52 
0,9889 98,89 1,11 0,9136 91,36 8,64 1,0114 101,14 1,14 
0,9807 98,07 1,93 1,0182 101,82 1,82 1,0112 101,12 1,12 
Trung bình 97,26 95,31 101,31 
RSD% 2,27 4,63 0,79 
5 
4,8562 97,12 2,88 5,2589 105,18 5,18 5,5929 111,86 11,86 
5,4818 109,64 9,64 5,2650 105,30 5,30 5,5613 111,23 11,23 
5,3358 106,72 6,72 5,4593 109,19 9,19 5,3505 107,01 7,01 
5,5189 110,38 10,38 5,3558 107,12 7,12 5,3900 107,80 7,80 
5,1529 103,06 3,06 4,9725 99,45 0,55 5,0534 101,07 1,07 
Trung bình 105,38 105,25 107,79 
RSD% 5,16 3,45 3,99 
10 
10,0201 100,20 0,20 10,0245 100,25 0,25 11,0362 110,36 10,36 
10,4338 104,34 4,34 10,7373 107,37 7,37 11,3022 113,02 13,02 
10,1772 101,77 1,77 10,0769 100,77 0,77 11,2157 112,16 12,16 
9,5559 95,56 4,44 10,4507 104,51 4,51 10,2455 102,45 2,45 
10,1030 101,03 1,03 10,6408 106,41 6,41 10,2799 102,80 2,80 
Trung bình 100,58 103,86 108,16 
RSD% 3,19 3,12 4,75 
PL-74 
2.2.6. Giới hạn định lượng dưới (LLOQ) 
Bảng PL11.39. Số liệu thẩm định độ đúng và độ chính xác tại nồng độ 0,1 µg/mL 
STT 
Diện tích pic 
AS/IS 
Nồng độ 
PTX thực 
tế (𝛍𝐠/𝐦𝐋) 
Nồng độ 
PTX tìm 
thấy 
(𝛍𝐠/𝐦𝐋) 
Tỷ lệ 
phục 
hồi 
(%) 
Độ lệch 
(%) 
AS IS 
1 9865 698324 0,0141 
0,1 
0,1031 103,11 3,11 
2 9673 684340 0,0141 0,1032 103,17 3,17 
3 8984 685302 0,0131 0,0957 95,69 4,31 
4 9174 693420 0,0132 0,0966 96,57 3,43 
5 9734 695464 0,0140 0,1022 102,16 2,16 
6 9298 689434 0,0135 0,0984 98,44 1,56 
TB ± SD 99,86 ± 3,38 
2.3. KẾT QUẢ NỒNG ĐỘ PTX PHÂN BỐ TRONG MÔ THỎ VÀ CHUỘT 
2.3.1. Thỏ 
Bảng PL11.40. Nồng độ PTX trong mô thỏ sau khi tiêm thuốc đối chứng 
Mô 
Thời điểm 
(giờ) 
Nồng độ PTX (µg/g) 
TB SD 
Thỏ 1 2 3 4 5 6 
Gan 
0,5 10,70 9,13 9,86 9,45 9,50 8,15 9,90 0,78 
2 2,46 1,33 1,27 1,70 1,25 1,47 1,69 0,67 
4 1,00 0,19 0,27 1,05 0,70 0,22 0,49 0,45 
8 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 
Thận 
0,5 6,39 5,46 6,25 6,32 5,10 6,80 6,03 0,50 
2 1,67 1,02 1,43 1,58 1,14 1,12 1,37 0,33 
4 0,99 0,29 0,42 1,05 1,04 0,55 0,57 0,37 
8 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 
Phổi 
0,5 8,55 8,47 7,76 8,24 9,19 7,87 8,26 0,43 
2 2,21 1,61 1,23 3,12 4,67 3,39 1,68 0,49 
4 0,99 0,29 0,42 0,55 0,62 0,75 0,57 0,37 
8 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 
Buồng 
trứng 
0,5 1,79 1,73 1,07 1,43 1,72 1,68 1,53 0,40 
2 0,82 0,65 0,88 0,50 0,75 1,31 0,88 0,12 
4 0,00 0,76 0,80 0,17 0,15 0,10 0,52 0,45 
8 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 
PL-75 
Bảng PL11.41. Nồng độ PTX trong mô thỏ sau khi tiêm dung dịch đậm đặc 
Mô 
Thời 
điểm (giờ) 
Nồng độ PTX (µg/g) 
TB SD 
Thỏ 1 2 3 4 5 6 
Gan 
0,5 14,49 17,60 12,25 18,45 15,60 12,10 14,78 2,69 
2 6,70 6,25 5,44 6,70 6,25 5,44 6,13 0,64 
4 1,78 1,72 1,69 1,72 1,70 1,69 1,73 0,04 
8 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 
Thận 
0,5 10,91 11,49 9,74 9,95 10,5 9,80 10,71 0,89 
2 4,80 4,41 4,93 4,58 4,14 4,87 4,71 0,27 
4 2,46 2,04 1,85 2,00 2,04 1,95 2,12 0,31 
8 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 
Phổi 
0,5 7,11 9,39 8,06 8,24 9,19 7,87 8,19 1,14 
2 3,12 4,67 3,39 3,12 4,67 3,39 3,72 0,83 
4 2,04 1,62 2,21 2,04 1,62 2,21 1,96 0,30 
8 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 
Buồng 
trứng 
0,5 1,43 1,72 1,68 1,43 1,72 1,68 1,61 0,16 
2 0,50 1,65 1,31 0,50 1,65 1,31 1,15 0,59 
4 0,17 0,15 0,10 0,17 0,15 0,10 0,14 0,03 
8 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 
2.3.2. Chuột 
Bảng PL11.42. Nồng độ PTX trong mô chuột sau khi tiêm thuốc đối chứng 
Mô 
Thời điểm 
(giờ) 
Nồng độ PTX (µg/g) 
TB SD (%) 
Chuột 1 2 3 4 5 6 
Gan 
0,5 57,77 55,60 63,58 57,81 55,74 61,69 58,70 3,2 
1 41,43 33,86 52,99 48,00 47,78 49,81 45,65 6,9 
2 28,40 24,46 24,15 32,36 30,73 23,80 27,32 3,7 
4 11,09 11,54 13,51 15,25 13,44 14,76 13,27 1,7 
6 5,54 4,18 9,70 10,85 6,24 7,07 7,26 2,5 
8 0,03 0,27 0,01 0,04 0,38 0,29 0,17 0,2 
Thận 
0,5 25,52 21,03 21,47 23,30 19,19 18,69 21,53 2,6 
1 14,40 13,81 16,34 14,65 11,34 14,32 14,14 1,6 
2 8,72 7,13 11,17 13,12 9,25 10,80 10,03 2,1 
4 6,86 4,61 6,76 4,54 5,43 4,13 5,39 1,2 
6 1,89 3,33 4,03 4,63 2,81 3,02 3,29 1,0 
8 0,27 0,42 0,55 0,78 0,50 0,19 0,45 0,2 
Phổi 
0,5 12,05 13,06 12,44 11,09 12,17 13,10 12,32 0,7 
1 10,02 10,58 9,97 9,96 8,56 9,66 9,79 0,7 
2 6,38 6,59 7,44 5,60 7,49 5,85 6,56 0,8 
4 2,85 3,27 3,47 4,15 2,23 4,91 3,48 0,9 
PL-76 
6 2,10 3,31 1,60 1,67 1,30 2,17 2,03 0,7 
8 0,46 0,25 0,39 0,24 0,26 0,31 0,32 0,1 
 Bảng PL11.43. Nồng độ PTX trong mô chuột tiêm dung dịch đậm đặc 
Mô 
Thời điểm 
(giờ) 
Nồng độ PTX (µg/g) 
TB SD (%) 
Chuột 1 2 3 4 5 6 
Gan 
0,5 54,71 62,27 66,11 61,74 55,37 64,62 60,80 4,7 
1 51,76 49,06 54,52 57,84 55,59 56,40 54,20 3,2 
2 28,53 36,10 24,16 33,92 32,49 31,35 31,09 4,2 
4 15,05 22,94 13,83 18,74 17,32 14,44 17,05 3,4 
6 6,01 9,66 6,88 13,47 11,41 7,23 9,11 2,9 
8 0,19 0,15 0,17 0,09 0,19 0,17 0,16 0,0 
Thận 
0,5 21,84 20,02 21,66 19,53 15,18 16,58 19,14 2,7 
1 14,53 14,59 14,71 15,30 13,66 14,86 14,61 0,5 
2 9,26 9,98 9,78 10,06 10,80 12,02 10,32 1,0 
4 6,33 5,13 6,69 4,61 4,21 8,12 5,85 1,5 
6 3,00 2,50 3,73 3,03 2,89 4,53 3,28 0,7 
8 0,49 0,53 0,19 0,28 0,24 0,27 0,33 0,1 
Phổi 
0,5 13,64 13,94 14,58 12,71 12,17 12,86 13,32 0,9 
1 9,90 10,41 10,70 11,98 9,95 12,69 10,94 1,1 
2 7,92 7,78 6,53 7,53 7,73 8,75 7,71 0,7 
4 4,00 3,75 3,22 2,40 4,18 5,32 3,81 1,0 
6 1,86 2,79 1,67 3,27 1,30 2,04 2,16 0,7 
8 0,52 0,75 0,55 0,42 0,12 0,21 0,43 0,2